Antibody recognition of synthetic peptides mimicking immunodominant regions of HIV-1 p24 and p17 proteins / Reconocimiento por anticuerpos de péptidos sintéticos que imitan regiones inmunodominantes de las proteínas p24 y p17 de VIH-1

The gag gene of HIV-1 encodes a single open reading frame of 55 kDa that contains three subdomains: the matrix domain (p17), the capsid domain (p24) and the nucleocapsid domain (p15). The p24 and p17 proteins have a predominant a-helical structure and perform important functions throughout thevirallife-cycle. The determination of gag-specific antibodies is important because declining titers of these antibodies herald clinical deterioration.In this work we present the results obtained on immunoreactiviy of synthetic peptides that mimic immunogenic a-helical regions of p24 and p17. The influence on the immunoreactivity of structural modifications in native sequences, including the addition of non immunogenic side chains: AAAC- and -CAAA on both side of minimal epitopes was evaluated in indirect and competitive enzymeimmunoassays. The conformational characteristcs to the peptides were analysed by circular dichroism and these results were correlated with that obtained in the immunoassays. It was shown that the reactivity of peptides mimicking short a-helical regions of p24 and p17 is improved by adding short non immunogenic chains on both N- and C- terminus. These modifications enhanced the immobilization of the peptides onto the solid support and allowed more accesibility to the minimal epitopes byspecific antibodies, in solution.

El gen gag del VIH-1 codifica una región de 55kDA que contiene tres subdominios: matriz (p17), cápside (p24) y nucleocápside (p15). Las proteínas p24 y p17 tienen una estructura predominante helicoidal y cumplen un rol importante en el ciclo de vida del virus. En este trabajo presentamos los resultados de inmunorreactividad de péptidos sintéticos que imitan regiones helicoidales de p24 y p17. Utilizando enzimoinmunoensayos se evaluó la influencia de modificaciones en las secuencias nativas sobre la capacidad de reconocimiento de anticuerpos específicos en solución y en fase sólida, incluyendo el agregado de cadenas no inmunogénicas en ambos extremos de los epitopes mínimos. La conformación de los péptidos se determinó por dicroísmo circular y los resultados se correlacionaron con los de inmunorreactividad. Se observó que la capacidad de reconocimiento de anticuerpos por péptidos pequeños que imitan estructuras helicoidales de p24 y p17 mejoró con el agregado de cadenas no inmunogénicas en ambos extremos de los epitopes. Estas modificaciones mejoran la inmovilización sobre las superficies sólidas y permiten una mayor accesibilidad de los anticuerpos a los epitopes mínimos en solución.

Evaluación de péptidos sintéticos para la detección de anticuerpos contra el virus de inmunodeficiencia humana / [Evaluation of synthetic peptides for the detection of antibodies against human immunodeficiency virus]

The serologic diagnosis of human immunodeficiency virus (HIV) infection is currently done by detecting the presence of antibodies against the different antigenic viral proteins through immunoassays and later confirmation by Western blot. Several types of antigens can be used in immunoassays, but recombinant proteins and synthetic peptides are the most frequently used. In this paper, peptides mimicking antigenic regions from p24 (region 196-224), gp41 (region 600-614) and gp120 (region 303-338, Loop V3) proteins of HIV-1 have been used as antigens in an enzyme-linked immunosorbent assay and their reactivity was screened against a panel of positive and negative sera. Six antigenic mixtures containing different amounts of each peptide were prepared, and the one consisting of 1 microgram of gp41-15, 0.5 microgram of p24-1 and 0.5 microgram of gp120-1 per well has shown the best performance to differentiate positive and negative serum samples, with sensitivity and specificity values of 99.18

, respectively. Considering the potential utilization of this system for screening of HIV infection, it would be relevant to evaluate the additional incorporation of sequences derived from Argentine local circulating viral variants to improve the diagnostic sensitivity of the assay, allowing the development of an ELISA based on specific viral sequences.

Caracterización de ácidos grasos y productos de degradación de ácidos micólicos en especies micobacterianas de mayor incidencia en Argentina / Characterization of fatty acids and mycolic acid cleavage products in mycobacteria of major incidence in Argentina

El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) causa un profundo impacto sobre el problema de la tuberculosis tanto en los países industrializados como en los en vías de desarrollo. Enfermedades graves causadas por micobacterias no tuberculosas, la mayoría correspondiente al complejo Mycobacterium avium-intracellulare (MAC), se han vuelto muy comunes en asociación con la inmunosupresión severa. El aumento de la complejidad de las enfermedades micobacterianas ha estimulado el desarrollo de métodos de diagnóstico más rápidos y eficientes. En el presente estudio se caracterizaron los ácidos grasos y los productos de degradación de los ácidos micólicos celulares de las especies micobacterianas más frecuentes en la Argentina empleando cromatografía gaseosa (CG), para luego poder desarrollar una técnica rápida de identificación de especies. Los ácidos grasos y los ácidos micólicos de las células micobacterianas saponificadas fueron analizados como ésteres metílicos por CG capilar. Los principales ácidos grasos detectados en todas las especies estudiadas, con excepción de M. smegmatis, fueron los ácidos octadecenoico (18:1) y hexadecanoico (16:0). Los perfiles cromatográficos presentaron diferencias cuantitativas y no cualitativas entre las distintas especies. El ácido tuberculoesteárico se detectó en todas las micobacteias analizadas. Se observaron diferencias significativas (p<0,01) en las medias de las cantidades relativas de algunos ácidos grasos entre aislamientos clínicos de M. tuberculosis, M. bovis y MAC. Se detectaron trazas de 2-elcosanol en cepas de M. tuberculosis H37Rv. Aunque se estudió un número limitado de cepas y de especies, los resultados preliminares indican que este método podría ser usado para caracterizar cultivos micobacterianos